click below
click below
Normal Size Small Size show me how
INŻ GEN
Inżynieria genetyczna
| Question | Answer |
|---|---|
| Definicja genu i transgenu oparta jest na właściwości strukturalne i funkcjonalne kwasów nukleinowych oraz mechanizmu, który determinuje jego obecność w genomie: | gen: fragment kwasu nukleinowego kodujący białka i RNA transgen: gen wprowadzony do genomu na drodze naturalnej lub na drodze inżynierii genetycznej |
| Jednostki strukturalne genu eukariotycznego podaje, że zawiera część regulatorową w obrębie, której znajduje się promotor i część kodującą zawierającą zwykle egzony i introny ze zdefiniowanym miejsce startu transkrypcji oraz część terminatorową | Promotor poprzedza część kodującą/miejsce startu transkrypcji zależy od interakcji z produktami innych genów/introny nie mogą kodować funkcjonalnego DNA, funkcjonalny RNA |
| Splicesom jest odpowiedzialny za proces dojrzewania i jego składową snRNA; zdecydowana większośc jest transkryb przez polimerazę II tylko U6snRNA jest transkryb przez III; Eksperyment, który mowi, że tranksr U6snRNA jest silnie zależna od alfa-amanityny | Gen znajduje się pod kontrolą polimerazy II chociaż transkrybowany przez polimerazę III |
| wektorem plazmid jest pBluescript, którego elementami strukturaln są ori replikacji-determinujący obecność plazmidu w setkach kopii na pojedynczą ko, AmpR- genoporności na antybiotyk, promot polimeraz T7 i T3są na końcach miejsca klonowania genu, FAG M13 | Umożliwiają selekcję biało-niebieską: dają możliwość syntezy jednoniciowego DNA |
| Obie formy faga lambda tj. litycz i lizogen są do klonowania obcego DNA. Cykl lityczny zaczyna się ekspresją genów fagowych z promotorów PL i PR, których funkcjonalność jest kontrolowana przez; Cykl lizogen to wbudowanie się genomu faga do g komórki gosp | cI represora; homologicznej rekombinacji att sekwencji |
| Opracowano kilka sposobów klonowania nieznanych sekwencji DNA a szczególnie promotorów genów. Najprostszą i najczęściej stosowaną ze względu na skutecznośc jest technika RACE, której cechami są | Przygotowanie matrycy o wielkości fragmentów około 20kb, dołączenie sekwencji homopolimerowych przy użyciu terminalnej transferazy, PCR ze starterem swoistym i homopolimerowym |
| Wskaż prawidłowe uszeregowanie wektorów pod względem pojemności: | Bakteryjny plazmidowy/ fagowy/ cosmidowy/ bakteryjny chromosomowy/ drożdżowy chromosomowy |
| Istniejące naturalnie w komórce mechanizmy wyciszania ekspresji genów posiadają regulatorowe znaczenie dla całej komórki a nawet organizmu, mechanizmy te wykorzystuje się również w weryfikacji eksperymentalnej funkcji genu, mechanizmy są oparte na: | Metylacji genu/syntezie RNAi/nadekspresji genu homologicznego/ekspresji antysensu |
| Metylacja sekwencji genomowych eukariontów jest niewątpliwie jednym z najistotniejszych mechanizmów regulujących jego funkcjonalność, jaka zasada ulega tej modyfikacji, jak ocenia się czy sekwencja jest modyfikowana: | Cytozyna (5met)/izolacja DNA/trawienia restryktazami HpaII-MspI/reakcja PCR/elektroforeza fragmentów |
| Genom ludzki zawiera 7 genów kodujących 7 izoform białka14-3-3o funkcji adaptorowej a genom roślinny zawiera 14 takich izoform:najlepszym sposobem umożliwiającym poznanie funkcji roślinnych, pojedynczych izoform jest wytworzenie roślin transgen transform | Konstruktem zawierającym 5’ lub 3’ nietranslatowany fragment konkretnej izoformy w odwróceniu orientacji |
| Łączenie sekwencji polinukleotydowych odbywa się sposobem tradycyjnym tj. przez nacięcie enzymami restrykcyjnymi i ligację na „tępo” lub „lepko” albo też łatwiejszym i wydajniejszym sposobem wykorzystującym zjawisko rekombinacji, miejsca rekombinacji są: | Wysoko homologiczne i długości 25-250 par zasad (wysoko homologiczne i długości poniżej 200 par zasad) |
| ukierunkowana mutagenezajest ta z użyciem tionukleotydów, polega na tym, że zmutowany, syntetyczn oligonukleotyd komplementuje się z jednoniciową matrycą a następnie oligonukleotyd jest przedłużany przy udziale polimerazy DNA i w obecności tionukleotydów: | Niektóre enzymy restrykcyjne nie nacinają wiązań tiofosforanowych w DNA |
| Temperatura topnienia kwasów nukleinowych jest tą w której połowa cząsteczek jest w formie zdysocjowanej, Tm dla dupaleksu DNA w porównaniu do RNA jest: | Wyższa |
| W metodzie izolacji plazmidowego DNA komórki bakteryjne eksponowane są na działanie pH 12-12,5 dlatego, że: | Wszystkie kwasy nukleinowe denaturują |
| Wymień trzy podstawowe cechy wektora plazmidowego: | oporny na antybiotyki, wielokopijny, z wieloma miejscami restrykcji |
| Jakiego wektora użyjesz do klonowania fragmentu o wielkości 500kb? | sztucznego chromosomu drożdżowego |
| Technologia opatrzona skrótem ZFN jest stosowana w modyfikacji genomowego DNA, jej podstawą jest rozpoznanie DNA i jego przecięcie oraz resynteza wiązań fosfodiestrowych, wskaż szczegóły: | Żodyn |
| TALE są wprowadzane do komórek roślinnych gospodarza za pośrednictwem mechanizmu nazywanego III typem sekrecji i wiążą się do genomowego DNA zmieniając transkrypcję co ułatwia bakteriom kolonizację komórek gospodarza. Wiązanie TALI do DNA odbywa się: | Spektrum wysoko konserwowanych 33-35 aminokwasowych powtórzeń rozpoznaje pojedynczą zasadę DNA |
| Technologia CRISPR jest najnowszym sposobem modyfikacji genomowego DNA, jej podstawą jest rozpoznanie DNA i jego przecięcie oraz resynteza wiązań fosfodiestrowych, wskaż szczegóły: | Pojedyncze nukleotydy są poznawane przez sekwencje regularnie rozdzielone krótkimi powtórzeniami palindrom, Cas 9 przecina obiec nici, resynteza wiązania następuje spontan przez łączenie niehomolog, przeciętych końców DNA lub homologi rekombinacji |
| Zjawiska takie jak niemal 100% akceptacja światła przez lewackie rośliny oraz magnetonawigacja ptaków jest możliwa do wyjaśnienia stosując biologię kwantową, której istotą jest: | Przenoszenie sygnału do centrum reakcyjnego charakterozowalnej spinową liczbę kwantową |
| W biolmol istotne były i są badania struktury i funkcji pojedynczych genów, które miały doprowadzić do poznania działania genomu, Nie do końca spełniły się oczekiwania i dzisiaj rozwija się dyscyplina o nazwie biologii systemów, której istota jest: | porównywanie funkcji pojedynczych genów między różnymi gatunkami |
| Klonowanie genu jest techniką zmierzającą do pozyskania dużej ilości jego kopii dla celów badawczych i wykorzystania w trans genezie i wymaga przeprowadzenia następujących czynności: | wybrania odpowiedniego sposobu detekcji/ oczyszczenia i otwarcia wektora/wszycie genu w wektor/łatwego monitorowania miejsca nacięcia i zszycia genu z wektorem/ wprowadzenia rekombinata do komórek gospodarza i selekcji komórek; |
| Transkrypcja genów eukariotycznych klasy drugiej dzieli się na 3 etapy, a mianowicie na inicjację, elongację i germinację, pierwszy z nich wymaga utworzenia kompleksu preinicjacyjnego, którego elementami są: | TATA box/Inr motyw i czynniki transkrypcyjne TFIID/ TFIIA/TFIIB. |
| W technice PCR amplifik DNA 4x matrycy uzyskuje się w odpow cyklu przebiegu reakcji; produkty reakcji PCR identyfikuja się na 2 sposoby, a mianowicie SybrGreen i Taqman charakteryzujące się różną kosztochłonnością ale przede wszystkim czułością detekcji | cykl 2; czulszy TaqMan |
| Techniką poszukiwania funkcjonalnego genu gotowego do natychmiastowego użycia w tworzeniu GMO jest przeszukiwanie odpowiedniej biblioteki; biblioteka aby mogła być skutecznie użyta musi być zorientowana co oznacza, że końce genu powinny być wyznakowane | cDNA; fragmentami DNA rozpoznawanymi przez różne enzymy restrykcyjne |
| DNA faga tworzy około 105 łysinek na ug DNA i ilość ich zmniejsza się o 1-2 rzędy po wprowadzeniu zmian w fagowym DNA; dla ominięcia tego stworzono system in vitro pakowania DNA we wcześniej przygotowane elementy strukturalne faga, przygotowanie polega na | zmieszanie lizatów E. coli zakażonych lizogenicznym fagiem z mutacją w genie E i zakażonych lizogenicznym fagiem z mutacją w genie D |
| Jedną z metod wyciszania genu bez konieczności genetycznej transformacji roślin polegającej na infekcji eksplantatów, wytworzenie kalusa i regeneracji roślin jest technika z użyciem wirusa TRV, podstawą tej techniki jest: | dwudzielność genomu wirusa dającego dwa transkrypty gRNA1 i gRNA2, z których jeden (gRNA2) zawiera zbędne sekwencje mogące pomieścić obcy gen a oba transkrypty gdy zmieszane odtwarzają wirusa |
| Zjawisko wyciszania ekspresji genu możemy uzyskać przez: | wprowadzic konstrukt zawierający fragment badanego genu zarówno w orientacji sensownej i antysensownej-uzyskany w wyniku transkrypcji dupaleks RNA będzie sygnałem do wyciszenia genu |
| Wyizolowany DNA charakteryzuje się stosunkiem absorbancji 260/230=1,1 co oznacza, że: | Zanieczyszczony związkami organicznymi |
| TATA box i miejscami inicjacji transkrypcji promotorów genów szoku cieplnego u Drosophilia: | nie posiadają nukleosomów i wiążą nieswoiste i swoiste czynniki transkrypcyjne. |
| Sekwencje UPS (upster regulatory region) i TATA box drożdżowych genów GAL1 i GAL5 w procesie indukcji ekspresji: | UPS posiada nukleosomy a TATA box nie posiada |
| Selekcja biało- niebieskie | Sekwencja kodująca α-peptyd z operonu laktozowego umożliwiająca selekcję biało-niebieską transformantów |
| Metylacja sekwencji genomowych eukariontów jest niewątpliwie jednym z najistotniejszych mechanizmów regulujących jego funkcjonalność. Jaka zasada ulega tej modyfikacji, jak ocenia się czy sekwencja jest modyfikowana: | Cytozyna (5met)/izolacja DNA/trawienie restryktazami Hpall-Mspl/reakcja PCR/elektroforeza fragmentów |