Help
Options
Didn't know it?
click below
click below
Knew it?
click below
click below
Don't Know
Remaining cards (0)
Know
retry
shuffle
restart
0:00
Embed Code - If you would like this activity on your web page, copy the script below and paste it into your web page.
Normal Size Small Size show me how
Normal Size Small Size show me how
Immunologia - ĆW3
Fagocytoza
| Question | Answer |
|---|---|
| Jak nazywa się najczęściej stosowany test do analizy metabolicznej komórki? | MTT |
| Jaka jest zasada testu MTT? cz.1 | Dehydrogenaza mitochondrialna przekształca poomarańczową, rozpuszczalną w wodzie sól tetrazolową do ciemnoniebieskiego, nierozpuszczalnego formazanu. |
| Jaka jest zasada testu MTT? cz.2 | Po rozpuszczeniu kryształów formazanu w DMSO/izopropanolu, powstaje barwny roztwór, którego intensywność zabarwienia mierzona jest spektrofotometrycznie w zakresie długości fal 492–570 nm. |
| Jaka jest zasada testu MTT? cz.3 | Ilość barwnego zredukowanego MTT jest proporcjonalna do aktywności oksydacyjnej mitochondriów komórki, a w ściśle określonych warunkach doświadczalnych do liczby aktywnych metabolicznie (żywych) komórek w populacji. |
| Jakie jest zastosowanie testu MTT? | Ocena działania cytotoksycznego. Analiza aktywności metabolicznej komórki. Określanie żywotności komórek w populacjach komórek już nie dzielących się, ale aktywnych metabolicznie. Ocena proliferacji komórek. |
| Czym jest test MTS? | Udoskonalona wersja MTT. Produkt reakcji konwersji soli tetrazolowej przez dehydrogenazę powstaje w obecności PMS (ang. phenazine methosulfate) i jest w pełni rozpuszczalny w wodzie. |
| Co jest miarą aktywności cytotoksycznej w przypadku testu MTS? | Wartość stężenia IC50 (ang. inhibitory concentration), czyli takie jego stężenie, przy którym proliferacja/żywotność komórek zostaje zahamowana w 50%, w odniesieniu do kontroli. |
| Jak określa się IC50? | W celu wyznaczenia wartości IC50 należy wykonać wykres zależności określonego parametru np. żywotność komórek (wyrażone jako procent w stosunku do kontroli, którą przyjmuje się za 100%) od stężenia badanego związku - krzywa dawka-efekt. |
| Test MTT - w skrócie | Test MTT to testy kolorymetryczne do pomiaru aktywności enzymów, które redukują MTT do barwników formazanowych, dając purpurowy kolor. |
| Dlaczego test MTT może być używany do określania cytotoksyczności związków terapeutycznych? | Ponieważ związki te pobudzają lub hamują żywotność i wzrost komórek. |
| Od czego zależy redukcja MTT w komórce? | Jest spowodowana aktywnością glikolityczną w komórce i jest zależna od obecności NADH i NADPH. |
| Negatywna kontrola w teście MTT | HL60 stymulowane z przeciwciałem anty-CD95 (CD95 to receptor Fas) |
| Pozytywna kontrola w teście MTT | Jurkat stymulowane z przeciwciałem anty-CD95 oraz HL60 i Jurkat z etopozydem |
| Dlaczego oznacza się w teście MTT dwie długości fali: 570 nm i 630 nm? | 570 służy do oznaczania produktu reakcji testu MTT. 630 jest referencyjną długością fali mającą wyeliminować wpływ wytrąconych białek lub resztek komórkowych, które mogą zakłócać odczyt. |
| Fagocytoza | Rozpoznawanie i zależny od aktyny proces internalizacji cząsteczek większych niż 0,5 μm do fagosmówi; jest kluczowym procesem w rozwoju, homeostazie tkanek i odporności. |
| Jak rozwinęła się fagocytoza ewolucyjnie? | Na wczesnym etapie ewolucji: jest ona widoczna w organizmach jednokomórkowych, które wykorzystują ją do odżywiania, zaś wyspecjalizowane fagocyty pojawiły się w organizmach wielokomórkowych, nawet zanim rozwinął się układ naczyniowyn |
| Komórki fagocytujące u ssaków | Makrofagi, komórki dendrytyczne i granulocyty. Chociaż nie są w stanie internalizować drobnoustrojów, fibroblasty, komórki nabłonkowe i komórki śródbłonka mogą również przeprowadzać fagocytozę. |
| Jaką rolę pełnią fibroblasty, komórki nabłonka i komórki śródbłonka w procesach fagocytotycznych? | Komórki te mogą spożywać ciałka apoptotyczne, przyczyniając się w ten sposób do usuwania miliardów komórek, które są codziennie zastępowane nowymi. |
| Główne etapy fagocytozy | 1. Chemotaksja i przyczepianie się drobnoustroju do fagocytów, 2. Pochłanianie patogenu przez fagocyt – zmiany cytoszkieletu, 3 i 4. Tworzenie fagosomu, a następnie fagolizosomu |
| Chemotaksja | Chemotaksja to ruch organizmu w odpowiedzi na bodziec chemiczny. |
| Jakie występują sygnały chemotaktyczne w fagocytozie? | Składniki dopełniacza (C5a, C3b), N-formylowane peptydy (pochodzące z bakterii lub syntetyzowane), czynnik aktywujący płytki krwi (PAF), leukotrien B-4 (LTB-4). |
| W jaki sposób fagocyty rozpoznają swoje "ofiary"? | Na powierzchni fagocytów występuje wiele receptorów, zdolnych do rozpoznawania ligandów, które z kolei ulegają ekspresji na powierzchni czynników infekcyjnych i komórek apoptotycznych oraz wyzwalają pochłanianie. |
| Czym charakteryzują się receptory na powierzchni fagocytów? | Receptory są zdolne do „komunikacji” między sobą. Receptory te bezpośrednio rozpoznają ligand lub rozpoznają cele pokryte cząsteczkami opsonin. |
| Przykłady receptorów na powierzchni fagocytów? | Receptory rozpoznające IgG (FcyR) lub dopełniacz. |
| Opsonina | Opsonina – rozpuszczalna cząsteczka, która po związaniu z antygenem, zwiększa wychwyt patogenu w procesie fagocytozy. |
| Po co istnieje opsonizacja? | Opsonizacja zwiększa skuteczność i różnicuje repertuar rozpoznawczy fagocytów. |
| Jakich cząsteczek dotyczy opsonizacja? | Cząsteczki opsonin obejmują przeciwciała, białka dopełniacza i krążące białka (lektyna wiążąca mannozę - MBL, fibronektyna, witronektyna). |
| PRR | Receptory rozpoznające wzorce - pattern-recognition receptors |
| PAMP | Wzory molekularne związane z patogenami - pathogen-associated molecular patterns |
| Receptory rozpoznające wzorce PRR | Receptory, które rozpoznają wzory molekularne często związane z patogenami, takie jak np. lipopolisacharyd występujący w ścianach komórek bakterii Gram-. |
| Wzory molekularne związane z patogenem (PAMP) | Wzory molekularne występujące w mikroorganizmach, ale nie w komórkach ssaków. Przykłady obejmują związki zawierające mannozę oraz różne składniki drobnoustrojów. |
| Przykłady PAMP | Lipopolisacharyd, hipometylowany DNA, flagelina i dwuniciowy RNA |
| Jakie receptory biorą udział w fagocytozie? | CD14, Fcγ, integryny, MR, receptory zmiatacze |
| Gdzie występuje receptor CD14? | Jest silnie ekspresjonowany głównie przez monocyty i makrofagi |
| Jaki PAMP rozpoznaje receptor CD14? | CD14 może wiązać LPS, ale tylko w obecności białka wiążącego LPS (LBP). |
| Jaką funkcję pełni CD14? | CD14 może wiązać LPS. CD14 jest również zaangażowany w rozpoznawanie i internalizację komórek apoptotycznych. |
| Jaki PAMP rozpoznaje receptor Fcγ? | Wiążą część Fc IgG. |
| Czym różnią się od siebie poszczególne receptory Fcγ? | Zdolnością do wiązania różnych podklas IgG w rozpuszczalnych i skompleksowanych immunologicznie postaciach. |
| Jakie elementy strukturalne odpowiadają za zdolność Fcγ do wiązania różnych podklas IgG? | FcγR posiadają motyw aktywujący ITAM (immunoreceptor tyrosine-based activation motif) lubhamujący ITIM (IT inhibitory motif), a kilka typów aktywujących FcγR ulega wspólnej ekspresji przez makrofagi wraz z hamującym FcγRIIB. |
| W jaki sposób receptory Fcγ regulują fagocytozę? | Równowaga między aktywującymi i hamującymi receptorami Fcγ ma znaczący wpływ na fagocytozę. |
| Jak zbudowane są integryny? | Składają się z kombinacji jednej podjednostki α i jednej β, których jest odpowiednio 18 i 8 typów. |
| Jakie integryny są zaangażowane w fagocytozę? | M.in. αMβ2 (tzw, Mac1). |
| Jak działa integryna Mac1? | Jest zdolna do wiązania co najmniej 30 różnych ligandów, w tym plastiku. Może pośredniczyć w fagocytozie patogenów zarówno opsonizowanych, jak i nieoponsonizowanych |
| Jaki PAMP rozpoznaje receptor mannozowy? | Rozpoznaje neoglikoproteiny zawierające mannozę i fukozę. |
| Jakie patogeny rozpoznaje receptor mannozowy? | MR jest w stanie rozpoznać drożdże, niektóre bakterie i grzyb Pneumocystis carinii. |
| Jaki PAMP rozpoznaje receptor Dektyna-1? | Receptor β-1,3-glukanu, który rozpoznaje drożdżowy produkt ściany komórkowej zymosan w kontekście TLR2 i TLR6. |
| SR | scavenger receptors, receptory zmiatacze |
| Jaki PAMP rozpoznają receptory zmiatacze? | Np. kwas lipotejchojowy (LTA), lipopolisacharyd (LPS) pochodzące od patogenu i inne lipopeptydy. |
| Jak działają receptory zmiatacze | Mają zdolność wiązania bakterii Gram+ i Gram-. Ponadto mają zdolność do rozpoznawania zmodyfikowanych własnych komórek organizmu, ponieważ rozpoznają β-amyloid, utlenione i acetylowane lipidy oraz komórki apoptotyczne |
| Przykłady receptorów zmiataczy? | SRA, MARCO, CD36 i LOX. |
| Jaka jest ogólna funkcja receptorów na powierzchni fagocytów? | Receptory nie tylko wyzwalają pochłanianie, ale także działają w celu określenia konsekwencji fagocytozy jako prozapalnej lub przeciwzapalnej |
| Które receptory nie są w stanie zainicjować pochłaniania cząsteczek? | TLR - służą do wywoływania lub modulowania odpowiedzi. |
| Jaki PAMP rozpoznają receptory TLR? | Kwas lipotejchojowy (LTA), lipopolisacharyd (LPS), flagelina, peptydoglikan, CpGDNA, składniki związane z replikacją wirusa (ss i dsRNA) [ |
| Jak działaj receptory TLR? | Wiązanie specyficznych antygenów prowadzi m.in. do aktywacji czynnika transkrypcyjnego NF-κB oraz do produkcji interferonów α i β. |
| Jaki jest skutek przyłączenia ligandu do receptora na powierzchni fagocytu? | Receptory fagocytarne aktywują liczne szlaki sygnałowe, których skutkiem jest m.in. rearanżacja cytoszkieletu aktynowego. Prowadzi to do przemieszczania się błony i tworzenia pseudopodiów, dzięki czemu możliwa jest internalizacja patogenu. |
| Jaką funkcję pełnią FcγR zawierające ITAM? | Aktywowane zostają GTPazy Rap, prowadząc do wewnętrznej aktywacji integryn. Aktywowana integryna może dodatkowo aktywować Rap, jak również GTPazy z rodziny Rho. Łącznie prowadzi to do polimeryzacji aktyny. |
| "Zippering" phagocytosis | W tym przypadku zamykanie się błony nad bakterią (lub innym czynnikiem) przebiega łagodniej i przypomina zamykający się suwak. |
| Jakie mechanizmy promują fagocytozę typu "zippering"? | Jest inicjowana przez receptory Fc i Dektynę-1; tu internalizacja cząstek opsonizowanych wymaga sekwencyjnego oddziaływania receptor-ligand. |
| Jakie mechanizmy promują fagocytozę typu "sinking"? | Jest inicjowana przez receptory dla składników dopełniacza. |
| „Sinking” phagocytosis | Nie obejmuje widocznego rozciągania błony wokół cząsteczki. Zamiast tego cząsteczka jest wciągana do komórki, a błona plazmatyczna zamyka się wokół niej. |
| Co oznacza termin dojrzewanie fagosomu? | Fuzja fagosomu z endosomami i lizosomami. Zyskuje dzięki temu maszynerię komórkową niezbędną do zabijania i usuwania zinternalizowanych mikroorganizmów (enzymy bakteriobójcze, wakuolarną V-ATPazę i kompleks oksydazy NADPH). Zwiększa się kwasowość. |
| Jakie elementy w fagosomie są niezbędne do usuwania zinternalizowanych mikroorganizmów? | Enzymy bakteriobójcze, wakuolarna V-ATPaza i kompleks oksydazy NADPH. |
| Dlaczego w dojrzewającym fagosomie pH musi być kwaśne? | Ogranicza ona bezpośrednio wzrost mikroorganizmów i pośrednio zwiększa zdolność ich degradacji przez aktywację enzymów proteolitycznych, takich jak katepsyny D i L. |
| Jak dochodzi do zakwaszenia fagosomów? | Zakwaszenie fagosomów w makrofagach zachodzi głównie przez działanie V-ATPazy, która pompuje protony do światła fagosomu. |
| Jakie ziarnistości zawierają dojrzałe leutrofile? | Zidentyfikowano cztery kategorie ziarnistości: pierwotne (azurofilne), wtórne (specyficzne); trzeciorzędowe oraz pęcherzyki wydzielnicze. |
| Czym charakteryzują się ziarnistości pierwotne? | Obecnością mieloperoksydazy; |
| Czym charakteryzują się ziarnistości wtórne? | Zawartość obejmuje laktoferynę |
| Czym charakteryzują się ziarnistości trzeciorzędowe? | Zawartość obejmuje żelatynazę |
| Czym charakteryzują się pęcherzyki wydzielnicze? | Zawierają albuminę i fosfatazę alkaliczną. |
| Czym jest laktoferyna? | Białko wiążące żelazo (Fe3+), które również ogranicza przeżycie patogenu poprzez bezpośrednią interakcję z powierzchnią komórek drobnoustrojów. |
| W jaki sposób laktoferyna ogranicza przeżycie patogenu? | Wiąże żelazo - zelazo jest niezbędnym metalem, który działa jako kofaktor w kilku procesach bakteryjnych, w tym replikacji DNA. |
| NRAMP1 | Integralne białko błonowe wykazujące działanie bakteriostatyczne i przeciwpasożytnicze, które przypisuje się jego zdolności do pozbawiania światła fagosomu ważnych dwuwartościowych kationów, takich jak Zn2+ i Mn2+. |
| Lizozym - działanie | Hydrolizuje wiązania β-1,4-glikozydowe między głównymi składnikami strukturalnymi bakteryjnej warstwy peptydoglikanu, narusza integralność bakterii Gram+ |
| CAP | Kationowe peptydy przeciwdrobnoustrojowe, np. defensny. |
| Jak działają CAP? | Tworzą pory, które umożliwiają dyfuzję jonów przez błonę bakteryjną, co prowadzi do zniesienia gradientów i zaburzenia równowagi osmotycznej. |
| Po co neutrofile wydzielają ROS w tzw. wybuchu tlenowym? | Reaktywne wolne rodniki mogą utleniać biomolekuły i powodować śmierć komórki. |
| Jak zbudowana jest oksydaza NADPH? | Oksydaza NADPH jest enzymem wielopodjednostkowym, zbudowanym z podjednostek błonowych i rozpuszczonych, które składają się w kompleks, gdy komórki są stymulowane. Integralne białka błonowe tworzą flawocytochrom b558. |
| Jaką funkcję pełni oksydaza NADPH? | Oksydaza NADPH pośredniczy w wytwarzaniu anionu ponadtlenkowego (•O2-) przez przeniesienie elektronów z NADPH do tlenu cząsteczkowego. |
| Cytotoksyczność •O2- | Sam •O2- jest czynnikiem cytotoksycznym, ale może być także przekształcony do wysoce reaktywnego H2O2 (nadtlenek wodoru). |
| Cytotoksyczność H2O2? | H2O2 może prowadzić do powstawania toksycznych rodników hydroksylowych. Dodatkowo enzym mieloperoksydaza wykorzystuje H2O2 do konwersji jonów chlorkowych w kwas podchlorawy. |
| Jaki enzym bierze udział w przekształceniu •O2- do nadtlenku wodoru? | Dysmutaza ponadtlenkowa (SOD). |
| Jaką funkcję pełnią ROS i RNI (reaktywne formy azotu)? | Przyczyniają się do likwidacji patogenów poprzez nieselektywne niszczenie białek komórkowych, lipidów i kwasów nukleinowych. |
| Jak powstaje •NO? | W fagocytach jest katalizowane przez syntazę tlenku azotu typu 2, zwaną również indukowalną NOS (iNOS). |
| Jak działa idsukowalna syntaza tenku azotu typu 2? | iNOS w wyniku przeniesienia elektronu z NADPH, utlenia L-argininę, dając •NO i L-cytrulinę. •NO reaguje dalej z ROS, tworząc różne toksyczne RNI, takie jak nadtlenoazotyn (ONOO-). |
| Jak dochodzi do prezentacji antygenu przez DC? | Niedojrzałe DC skutecznie fagocytują zarówno nekrotyczne jak i apoptotyczne komórki nowotworowe, ale po otrzymaniu bodźca do dojrzewania (takiego jak ligandy dla TLR) tracą tę zdolność i stają się komórkami prezentującymi antygen. |
| Jak prezentowane są antygeny przez DC? | Dojrzałe DC prezentują fagocytowany antygen na MHC klasy II, aby aktywować limfocyty T CD4+, a także skutecznie prezentują internalizowany materiał na MHC klasy I w celu aktywacji limfocytów T CD8+. |
| Jakie jest powiązanie między fagocytozą a odpowiedzą immunologiczną? | Materiał fagocytowany jest źródłem peptydów antygenowych, które są albo ładowane na cząsteczki MHC klasy II w celu prezentacji limfocytom T CD4+ albo poprzez szlak endogenny są prezentowane krzyżowo na cząsteczkach MHC I w celu aktywacji komórek T CD8+ |
| Jak wykonuje się test na fagocytozę drożdży Saccharomyces cerevisiae przez zróżnicowane komórki HL-60? | Zabite i zabarwione błękiten trypanu drożdże inkubuje się razem z komórkami HL-60, które przeszły róznicowanie do monocytów/makrofagów przez inkubację z kalcytriolem. Oberwujemy pod mikroskopem. |
| Co to jest surowica AB? | Surowica typu AB służy jako źródło opsonin. Surowica typu AB nie ma przeciwciał anty-A i/lub anty-B, które można znaleźć w innych typach krwi. |
| Dlaczego do produkcji surowicy AB używa się krew męską? | Do produkcji tej surowicy stosuje się krew męską, ponieważ surowica kobieca może mieć więcej przeciwciał wynikających z przebytej ciąży. |
| Test NBT | Redukcja błękitu nitrotetrazolowego - jest wykorzystywany do oszacowania wybuchu tlenowego. |
| Na czym polega test NBT? | Utleniony NBT jest w roztworze bezbarwny do bladożółtego, a przez redukcję przekształcany jest do nierozpuszczalnego niebieskiego formazanu. |
| Jak dochodzi do redukcjiNBT w teście NBT? | Czynniki aktywujące wybuch tlenowy dyfundują do komórki i aktywują kinazę białkową C (PKC), która z kolei powoduje fosforylację podjednostki p47phox i aktywację oksydazy NADPH fagocytów. |
| Jakie czynniki aktywują wybuch tlenowy? | Są nimi np. estry forbolu. |
| Kiedy stosuje się test NBT? | Test NBT stosuje się m.in. w diagnostyce przesiewowej przewlekłej choroby ziarniniakowej. |
| Na czym polega przewlekła choroba ziarniniakowa? | Istotą jest defekt w tworzeniu reaktywnych form tlenu przez komórki fagocytujące. Przyczyną jest mutacja genów kodujących oksydazę NADPH. |
Created by:
biotech6