Help
Options
Didn't know it?
click below
click below
Knew it?
click below
click below
Don't Know
Remaining cards (0)
Know
retry
shuffle
restart
0:00
Embed Code - If you would like this activity on your web page, copy the script below and paste it into your web page.
Normal Size Small Size show me how
Normal Size Small Size show me how
Biofizyka - FLUO
| Question | Answer |
|---|---|
| Jak można badać CMC? | Można mierzyć fluorescencję, rozpraszanie światła (przez tworzące się micele), napięcie i ciśnienie powierzchniowe. przewodnictwo elektryczne roztworu i inne. |
| Jaka powinna być sonda do wyznaczania CMC? | Wykorzystywana sonda nie powinna emitować światła w roztworze wodnym, natomiast powinna fluoryzować w środowisku hydrofobowym. |
| Czym jest czas życia fluorescencji? | Średni czas pomiędzy chwilami wzbudzenia i powrotu do stanu podstawowego, inaczej naturalny czas życia cząsteczki, jeżeli powrót do stanu podstawowego następuje jedynie na drodze fluorescencji. |
| Czym jest polaryzacja fluorescencji? | Po wzbudzeniu molekuły światłem spolaryzowanym następuje emisja fotonu o niezmienionej płaszczyźnie polaryzacji. Jest to stwierdzenie prawdziwe tylko wtedy, kiedy cząsteczka jest nieruchoma przez czas życia fluorescencji. |
| Jak zmieni się płaszczyzna polaryzacji gdy cząsteczka rotuje? | O dany kąt α. |
| Jakie molekuły mają największe prawdopodobieństwo wzbudzenia przy naświetlaniu światłem spolaryzowanym? | Te molekuły, których moment dipolowy jest równoległy do kierunku drgań wektora pola elektrycznego światła padającego |
| Od czego zależy stopień polaryzacji? | Od wartości kąta α oraz ruchliwości wzbudzonych cząsteczek. |
| Czym jest rotacyjna depolaryzacja fluorescencji? | Istnienie różnicy między absorpcyjnym i emisyjnym momentem dipolowym (zmiana kąta α), na skutek ruchu cząsteczek fluoresceiny. |
| Czym jest anizotropia fluorescencji? | Światło emisji i absorpcji jest zazwyczaj liniowo spolaryzowane. Cząsteczki są w roztworze ułożone izotropowo. Selektywne wzbudzenie powoduje przejście układu w stan anizotropowy. |
| Co pozwala zbadanie parametru P (polaryzacja) i r (anizotropia)? | Można określić mikrolepkość środowiska, w którym znajduje się dany znacznik, a więc w przypadku błon biologicznych stopień uporządkowania cząsteczek fosfolipidów otaczających cząsteczkę fluoroforu. |
| Czym jest wygaszanie stężeniowe? | Gdy stężenie substancji przekroczy pewną granicę, fluorescencja zaczyna maleć i przestaje być zależna liniowo od stężenia. Jest efektem bezpromienistego transferu energii Förstera. |
| Czym jest wygaszanie kolizyjne? | Dochodzi do zderzenia dwóch molekuł podczas trwania wzbudzonego czasu życia jednej z nich. Fluorofor wraca do stanu S1 bez emisji fotonu. Jest to zatem proces dynamiczny, a energia stanu wzbudzonego zostaje rozproszona w postaci ciepła. |
| Jaki jest wpływ polarności rozpuszczalnika na maksimum energii i wydajność kwantową? | Ze wzrostem polarności środowiska długości fal maksimum absorpcji i emisji przesuwają się w kierunku fal dłuższych. |
| Jaki powinien być rozpuszczalnik do pomiarów fluorescencyjnych? | Nie powinien on absorbować w danej długości fali ani wpływać na parametry spektralne badanej substancji (np. wodę stosujemy przy wzbudzeniu powyżej 190 nm, etanol 96% -205 nm, a tetrachlorek węgla – 265nm). |
| Jak zmienia się wydajność kwantowa dla rozpuszczalników polarny? | Dla rozpuszczalników polarnych wartość wydajności kwantowych jest mniejsza. Oznacza to, że w tym przypadku wygaszanie energii wzbudzenia ma miejsce głównie na sposób bezpromienisty. |
| Jak zmienia sie czas życia fluorescencji dla różnych rozpuszczalników? | Najwyższy jest dla roztworów niepolarnych, najmniejszy dla polarnych. |
| Jaki jest wpływ pH na fluorescencję? | Stężenie protonów w roztworze ma duży wpływ na parametry spektralne cząsteczki, czyli absorbancję i fluorescencję. Spowodowane jest to zmianą ładunku elektrostatycznego cząsteczki w zależności od pK grup kwasowych czy zasadowych. |
| Przykłady sond fluorescencyjnych. | DPH, NBD-PC/PE, Bis-piren-PC, DiL, kwas cis-parinarowy, C4-bodipy C9, N-rodamino-PE-lizamina, DiA. |
| Do czego służy DPH? | Służy do wyznaczania CMC związków amfifilowych, a także do badania przejścia fazowego, solubilizacji dwuwarstwy przez detergenty. |
| Czym jest DPH? | Difenyloheksatrien. |
| Jak lokalizuje się DPH w błonie? | Jest bardzo hydrofobowy, samorzutnie wbudowuje się w błony, lokalizuje się całkowicie wewnątrz dwuwarstwy. |
| Dlaczego DPH niezbyt dobrze nadaje się do badania solubilizacji dwuwarstwy przez detergenty? | Ponieważ wewnątrz miceli powstałych po solubilizacji DPH również fluoryzuje. |
| Jaki parametr jest badany podczas badania solubilizacji dwuwarstwy i przejścia fazowego za pomocą DPH? | Polaryzacja fluorescencji DPH. |
| Z jakim innym związkiem NBD-PC tworzy parę FRET? | Z N-Rh-PE (lizaminą). |
| Na czym polega FRET z wykorzystaniem NBD-PC? | Eksperyment polega na naświetlaniu próbki falą wzbudzenia donora (NBD) oraz analizie intensywności fluorescencji akceptora (lizaminy). Przekazywanie energii jest zależne od odległości pomiędzy cząsteczkami donora i akceptora. |
| Co pozwala badać FRET z wykorzystaniem NBD-PC? | Badania odległości błon w liposomach MVV (ang. MultiVesicular Vesicles), badania fuzji błon, badanie przejścia fazowego dwuwarstwy oraz występowania domen o różnym stanie płynności w dwuwarstwie. |
| Czym jest NBD-PC? | Znakowany fluorescencyjnie fosfolipid. Fluorofor ulokowany jest na „głowie cząsteczki”, na zdefiniowanej głębokości względem powierzchni dwuwarstwy. |
| Jak wyznacza się przejście fazowe dwuwarstwy za pomocą NBD-PC/PE? | Po całkowitym zredukowaniu puli związku dostępnej w zewnętrznej monowarstwie, podczas przejścia reduktor dyfunduje poprzez dwuwarstwę i wygasza wewnętrzną pulę sondy. |
| Jak zmienia się polaryzacja fluorescencji przy NBD-PC? | NBD-PE/PC jest wrażliwy na upakowanie lipidów w bezpośrednim otoczeniu. Polaryzacja fluorescencji tego związku rośnie ze stopniem uporządkowania lipidów dookoła sondy. |
| Czym jest bis-piren-PC? | Fosfolipid znakowany cząsteczką pirenu na końcach łańcuchów węglowodorowych (atom Cω) |
| Jak działa piren jako sonda? | Może tworzyć dimery, zwane ekscymerami (ang. excimers), które wykazują się identyczną długością fali wzbudzenia i dłuższą falą emisji w porównaniu z monomerami. |
| Od czego zależy tworzenie excimerów? | M. in. od płynności błony i temperatury, czyli głównie od współczynnika dyfuzji lateralnej. |
| Jaki parametr jest badany podczas używania bis-pirenu-PC? | Ie/Im, to znaczy stosunek intensywności fluorescencji ekscymerów do monomerów. |
| Do czego służy mono-piren-PC? | Ekscymery powstają międzycząsteczkowo i służy to do pomiaru procesu fuzji, przejścia fazowego, stopnia płynności błon, występowania domen lipidowych w błonie oraz oddziaływania białek peryferyjnych z dwuwarstwą |
| Do czego służy bis-piren-PC? | Ekscymery powstają wewnątrz cząsteczki i sonda jest wówczas np. substratem dla PLA2 i służy do spektrofluorymetrycznego pomiaru aktywności tego enzymu. |
| Czym jest DiL? | Dialkilokarbocyjanina. |
| Do jakich badań wykorzystuje się DiL? | Do cytometrii przepływowej, do pomiaru zmian potencjałów błonowych, a także do badania fuzji, badania powstawania domen w monowarstwach, do obrazowania domen błonowych. |
| Dlaczego można wykorzystywać DiL do cytometrii przepływowej? | Ponieważ jest fotostabilny i można go wielokrotnie wzbudzać w krótkim okresie czasu. |
| Do czego wykorzystywany jest kwas cis-parinarowy? | Badania dynamiki błony, pomiary peroksydacji lipidów, przybliżanie stężenia antyoksydantów w błonie, detekcja oddziaływania typu lipid-lipid i lipid-białko. |
| Dlaczego kwas cis-parinarowy jest rzadko wykorzystywany do wyznaczania CMC? | Ze względu na długość cząsteczki. |
| Co czego używane są C4-bodipy C9? | Do detekcji ROSów (czyli w reakcji perox lipidów błonowych), do badania współczynnika dyfuzji lateralnej lipidów w błonie (metodą FRAP) oraz w badaniach stopnia hydratacji dwuwarstwy na różnej głębokości metodą solvent relaxation. |
| Do czego używane jest DiA? | Do znakowania błony neuronów. |
| Czym jest DiA? | Pochodne dialkilosterylowe. |
| Do czego wykorzystuje się piraninę? | Nie jest wykorzystywana do badania właściwości błon, lecz zmian pH. |
| Jakie cechy piraniny czynią z niej dobrego fluorofora? | Fluoryzuje w zakresie pH fizjologicznego, a jej absorbancja zależy od pH środowiska. |
| Czym jest punkt izozbestyczny? | Charakterystyczna długość fali, przy której różne formy spektralne związku chemicznego, występujące przy różnym pH, wykazują taką samą absorpcję. |
| Jak dostarczana jest karboksyfluoresceina do komórki? | Nie przechodzi przez błonę komórkową (i modelową), do komórek jest dostarczany w postaci mikroiniekcji lub zamknięty w liposomach (wówczas wymagana jest ich fuzja z komórką). |
| Jak wykorzystuje się karboksyfluoresceinę? | Jako znacznik w liposomach wykorzystywany jest do śledzenia ich wędrówki w krwioobiegu i miejsca akumulacji w organizmie. Jest indykatorem pH. Związana kowalencyjnie jako fluoresceina-PE - do określania zmian lokalnego, przybłonowego pH. |
| O czym mówi reguła Wawiłowa? | Wydajność kwantowa nie zależy od długości fali światła wzbudzającego. |
| Czym jest wydajność kwantowa? | Stosunek liczby kwantów światła wyemitowanych do zaabsorbowanych przez cząsteczki, opisuje prawdopodobieństwo zajścia fluorescencji. |
| Czym jest fluorescencja? | Emisja fotonu w wyniku przejścia elektronu ze wzbudzonego stanu singletowego do podstawowego stanu singletowego. |
| Czym jest fosforescencja? | Polega na emisji fotonu w wyniku przejścia elektronu ze wzbudzonego stanu podstawowego do wzbudzonego stanu tripletowego (zmiana multipletowości), po czym następuje przejście do podstawowego stanu singletowego. |
| Czym jest luminescencja? | Emisja światła jako rezultat absorpcji z innego źródła światła. |
| Czym jest fotoluminescencja? | Substancja wzbudzona promieniowaniem UV-Vis emituje światło na wskutek absorpcji. |
| Czym jest przejście bezpromieniste? | Energia wzbudzenia zostaje rozproszona w otoczeniu w wyniku nieuporządkowanego ruchu termicznego; tzw. konwersja wewnętrzna. |
| Czym jest przejście promieniste? | Energia wzbudzenia zostaje rozproszona poprzez emisję protonu, w momencie gdy elektron powraca na orbital o niższej energii. |
| O czym mówi reguła Stokesa? | Widmo fluorescencji jest przesunięte w kierunku fal dłuższych względem widma absorpcyjnego. |
| Czym jest widmo fluorescencji? | Wykres zależności natężenia fluorescencji (intensywności względnej) w funkcji długości fali emitowanej. |
| Czym jest bezwzględna wydajność kwantowa? | Stosunek liczby kwantów promieniowania wyemitowanego przez roztwór do liczby zaabsorbowanych kwantów promieniania wzbudającego, których kosztem powstaje emisja. Inaczej: prawdopodobieństwo fluorescencji (0-1) |
| Czym jest molowy współczynnik absorpcji? | Stała proporcjonalności związana z pochłanianiem promieniowania przez częściowo absorbujący i rozpraszający ośrodek. Wartość ε jest stała dla danego chromoforu oraz bezpośrednio zależy od długości fali promieniowania elektromagnetycznego. |
| Jakie aminokwasy wykazują fluorescencję? | Tryptofan, tyrozyna, fenyloalanina. (tyrozyna daje fluorescencję wygaszoną, a fenyloalanina to rzadkie przypadki). |
| Jakie czynniki mają wpływ na fluorescencję? | Temperatura, rodzaj rozpuszczalnika, stężenie substancji fluoryzującej, pH, siła jonowa, obecność śladowych substancji wygaszających. |
| Czym jest fluorofor? | Grupa atomów odpowiedzialna za fluorescencję cząsteczki. Najczęściej jest to grupa funkcyjna absorbująca promieniowanie elektromagnetyczne o określonej długości fali, a następnie emitująca promieniowanie o innej długości fali (ściśle określonej). |
| Czym charakteryzuje się dobry fluorofor? | Wysoką absorpcją światła, wysoką wydajnością kwantową, niską fotodestrukcją, małymi rozmiarami, łatwością doczepienia do biomolekuły. |
| Od czego zależy pasmo emisji danego fluoroforu? | Jest ono charakterystyczne dla fluoroforu, a dokładne położenie zależy od otoczenia. |
| Dlaczego w pewnym zakresie temperaturowym intensywność fluorescencji tryptofanu rośnie? | Podczas wzrostu temperatury dochodzi do rozfałdowania łańcucha białkowego, które powoduje wzrost intensywności emisji na skutek odsłonięcia reszt tryptofanowych. |
| Na czym opiera się fluorymetria? | Opiera się na liniowej zależności między IF a stężeniem próbki. IF, czyli intensywność fluorescencji jest wprost proporcjonalna do natężenia promieniowania wzbudzającego, absorbancji i wydajności kwantowej fluorescencji. |
| Czym różni się fluorescencja od fosforescencji? | Fluorescencja jest szybka i spontaniczna, fosforescencja trwa dłużej, fluorescencja ze stanu singletowego, fosforescencja z trypletowego, pasma fluo i absorpcji nakładają się, fosforescencji i absorpcji - nie. |
Created by:
biotech4