Help
Options
Didn't know it?
click below
click below
Knew it?
click below
click below
Don't Know
Remaining cards (0)
Know
retry
shuffle
restart
0:00
Embed Code - If you would like this activity on your web page, copy the script below and paste it into your web page.
Normal Size Small Size show me how
Normal Size Small Size show me how
Fluorymetria
| Question | Answer |
|---|---|
| Czym jest fluorescencja? | Emisja fotonu w wyniku przejścia elektronu ze wzbudzonego stanu singletowego do podstawowego stanu singletowego. |
| Czym jest fosforescencja? | Polega na emisji fotonu w wyniku przejścia elektronu ze wzbudzonego stanu podstawowego do wzbudzonego stanu tripletowego (zmiana multipletowości), po czym następuje przejście do podstawowego stanu singletowego. |
| Czym jest luminescencja? | Emisja światła jako rezultat absorpcji z innego źródła światła. |
| Czym jest fotoluminescencja? | Substancja wzbudzona promieniowaniem UV-Vis emituje światło na wskutek absorpcji. |
| Czym jest przejście bezpromieniste? | Energia wzbudzenia zostaje rozproszona w otoczeniu w wyniku nieuporządkowanego ruchu termicznego; tzw. konwersja wewnętrzna. |
| Czym jest przejście promieniste? | Energia wzbudzenia zostaje rozproszona poprzez emisję protonu, w momencie gdy elektron powraca na orbital o niższej energii. |
| O czym mówi reguła Stokesa? | Widmo fluorescencji jest przesunięte w kierunku fal dłuższych względem widma absorpcyjnego. |
| Czym jest widmo fluorescencji? | Wykres zależności natężenia fluorescencji (intensywności względnej) w funkcji długości fali emitowanej. |
| Czym jest bezwzględna wydajność kwantowa? | Stosunek liczby kwantów promieniowania wyemitowanego przez roztwór do liczby zaabsorbowanych kwantów promieniania wzbudającego, których kosztem powstaje emisja. Inaczej: prawdopodobieństwo fluorescencji (0-1) |
| Czym jest molowy współczynnik absorpcji? | Stała proporcjonalności związana z pochłanianiem promieniowania przez częściowo absorbujący i rozpraszający ośrodek. Wartość ε jest stała dla danego chromoforu oraz bezpośrednio zależy od długości fali promieniowania elektromagnetycznego. |
| Jakie aminokwasy wykazują fluorescencję? | Tryptofan, tyrozyna, fenyloalanina. (tyrozyna daje fluorescencję wygaszoną, a fenyloalanina to rzadkie przypadki). |
| Jakie związki naturalne wykazują fluorescencję? | Witaminy i hormony, np. ryboflawina; barwniki roślinne: chlorofile, bakteriochlorofile i karotenoidy; - zasady nukleinowe w DNA i RNA: adenina, guanina, cytozyna, tymina, uracyl; utleniona lucyferyna; chinina |
| Jakie związki sztuczne wykazują fluorescencję? | Luminol (wykrywanie krwi), fluoresceina (barwienie komórkowe) |
| Czym jest GFP? | Green Fluorescent Protein, naturalnie występujące małe białko, o strukturze β-beczułki, wykazujące fluorescencję w zielonej części widma pochodzącą od ugrupowania atomów trzech kolejnych aminokwasów: seryny, tyrozyny i glicyny. |
| Jakie czynniki mają wpływ na fluorescencję? | Temperatura, rodzaj rozpuszczalnika, stężenie substancji fluoryzującej, pH, siła jonowa, obecność śladowych substancji wygaszających. |
| Czym jest fluorofor? | Grupa atomów odpowiedzialna za fluorescencję cząsteczki. Najczęściej jest to grupa funkcyjna absorbująca promieniowanie elektromagnetyczne o określonej długości fali, a następnie emitująca promieniowanie o innej długości fali (ściśle określonej). |
| Czym charakteryzuje się dobry fluorofor? | Wysoką absorpcją światła, wysoką wydajnością kwantową, niską fotodestrukcją, małymi rozmiarami, łatwością doczepienia do biomolekuły. |
| Od czego zależy pasmo emisji danego fluoroforu? | Jest ono charakterystyczne dla fluoroforu, a dokładne położenie zależy od otoczenia. |
| Jak zbudowany jest spektrofluorymetr? | Źródło promieniowania (lampy ksenonowe, lasery), monochromator, próbka, monochromator (pod kątem prostym do próbki), detektor, rejestrator. |
| Dlaczego białka mogą być fluorescencyjne? | Dzięki obecności aminokwasów aromatycznych, w szególności tryptofanu; dzięki obecności grup prostetycznych połączonych z łańcuchem peptydowym, np. porfiryny. |
| Dlaczego w pewnym zakresie temperaturowym intensywność fluorescencji tryptofanu rośnie? | Podczas wzrostu temperatury dochodzi do rozfałdowania łańcucha białkowego, które powoduje wzrost intensywności emisji na skutek odsłonięcia reszt tryptofanowych. |
| Do jakich badań stosuje się fluorescencję? | Trzeciorzędowej strukury białek, konformacji lokalnych białek, kompleksowania, tworzenia wiązań białko-białko, białko-ligand, denaturacji białek. |
| Na czym opiera się fluorymetria? | Opiera się na liniowej zależności między IF a stężeniem próbki. IF, czyli intensywność fluorescencji jest wprost proporcjonalna do natężenia promieniowania wzbudzającego, absorbancji i wydajności kwantowej fluorescencji. |
| Na czym opiera się fluorescencyjna analiza jakościowa? | Badanie otoczenia fluoroforu i wpływu zmian otoczenia na fluorofor, a także badanie występowania różnych konformerów cząsteczki na skutek zmian strukturalnych. |
| Czym jest FRET? | Polega na rezonansowym przeniesieniu energii pomiędzy parą donor-akceptor. Chromofor-donor, będąc w stanie wzbudzonym, może przekazywać energię wzbudzenia chromoforowi-akceptorowi znajdującemu się w odległości nie większej niż 10 nm. |
| Jakie jest zastosowanie FRET? | Metoda badania interakcji między białkami: zmiany konformacyjne, hydroliza białek, oddziaływania białko-ligand, fuzja pęcherzyków lipidowych. |
| Czym jest filtr wewnętrzny? | Zmiana zakresu i intensywności światła emitowanego na skutek reabsorpcji lub w przypadku wysokiego stężenia molekuł absorbujących. |
| Na czym polega reabsorpcja? | Molekuła absorbuje światło o tej samej długości fali, którą ma światło emitowane przez fluorofor. Oznacza to, że niektóre lub wszystkie fotony emitowane przez fluorofor mogą być ponownie absorbowane; zapobieganie: zmiana fluorofora. |
| Dlaczego wysokie stężenie molekuł absorbujących zaburza wyniki fluorymetru? | Wynikiem tego jest nierównomierna intensywność światła wzbudzającego w roztworze, co powoduje, że tylko mały odsetek światła wzbudzającego dociera do fluoroforu i jest widoczny dla systemu analizującego; zapobieganie: zmniejszenie stężenia. |
| Na czym polega wygaszanie stężeniowe fluorescencji? | Molekuły same wygaszają swoją fluorescencję na skutek dużego stężenia. Mechanizm to np. przekazywanie energii między identycznymi molekułami, formowanie kompleksów. |
| Na czym polega wygaszanie statyczne fluorescencji? | Czyste wygaszanie statyczne zmniejsza intensywność fluorescencji, ale nie zmniejsza jej czasu życia. Zdarzają się próbki, w których jednocześnie dochodzi do wygaszania sta¬tycznego jak i dynamicznego. |
| Dlaczego absorbancja roztworu nie powinna być większa niż 0,2? | Filtr wewnętrzny I rodzaju - gdy A<0,2, intensywność emisji w każdym miejscu wzbudzonej próbki będzie taka sama. A>0.2, w miarę wynikania promieniowania świetlnego, intensywność światła absorbowanego maleje, a zatem, więcej emitowanego światła będzie wych |
| Czym jest moc sygnału fluorofora? | Iloczyn wydajności kwantowej i molowego współczynnika absorpcji. |
| Czym jest donor a czym akceptor w zjawisku FRET? | Donorem jest barwnik, który absorbuje energię i oddaje ją w procesie fluorescencji, natomiast akceptorem jest chromofor (niekoniecznie fluoryzujący), do którego energia jest przekazywana. |
| Jak zmienia się widmo fluorescencji przy zjawisku FRET? | Spadek intensywności emisji donora i wzrost intensywności emisji akceptora. |
| Jakie warunki muszą być spełnione, by zaszło FRET? | Odległość między donorem a akceptorem powinna wynosić nie więcej niż 10nm, a widmo absorpcji akceptora powinno nakładać się na widmo emisji donora. |
| Od czego uzależniona jest wartość R0 - odległości Froster? | Od wydajności kwantowej donora, współczynnika załamania światła roztworu oraz nakładania się widm spektralnych donora i akceptora. |
| Czym jest temperatura topnienia białek? | Temperatura przy której występuje 50% białka zdenaturowanego i 50% białka natywnego. |
| Czym jest stała dysocjacji kwasów? | Stała dysocjacji (stała jonizacji) – stała równowagi reakcji dysocjacji, czyli rozpadu związków chemicznych na poszczególne jony, zwykle pod wpływem rozpuszczalnika lub silnego pola elektrycznego. |
| Jakie kuwety są stosowane w pomiarach fluorymetrycznych? | Kuweta czterościennie przejrzysta ze względu na położenie monochromatorów. |
| Czym jest chinina? | Alkaloid o właściwościach antymalarycznych używany do produkcji toników, po rozpuszczeniu w kwasie cytrynowym wykazuje fluorescencję w zakresie widzialnym. |
| Na czym polega rozproszenie Ramana? | Większość fotonów rozproszonych ma tę samą częstość, co promieniowania padające, ale ich część ulega nieelastycznemu rozproszeniu wskutek czego ich częstość jest różna od wyjściowej (zaszła pewna utrata energii). |
| Jaki aminokwas wykazuje maksimum natężenia fluorescencji przy 304nm przy wzbudzeniu falą o długości 280nm? | Tyrozyna, tryptofan. |
| Czym różni się fluorescencja od fosforescencji? | Fluorescencja jest szybka i spontaniczna, fosforescencja trwa dłużej, fluorescencja ze stanu singletowego, fosforescencja z trypletowego, pasma fluo i absorpcji nakładają się, fosforescencji i absorpcji - nie. |
Created by:
gruszkowa